SIMONE MARIANO DA SILVA
Título da Dissertação: Efeitos inibitórios de extrato de casca de
pinhão (Araucaria angustifolia) nas alfaamilases salivar e pancreática
Orientador: Profa. Dra. Rosane Marina Peralta
Data da Defesa: 26/04/2013
RESUMO GERAL
INTRODUÇÃO E OBJETIVOS - Taninos são moléculas consideradas como inibidoras de diversas hidrolases, incluindo as amilases. A descoberta de novos materiais ricos em taninos com propriedades inibidoras de amilases pode contribuir para a descoberta de novas drogas úteis para o controle e tratamento de diabetes, obesidade e outras desordens fisiológicas. Araucaria angustifolia é uma conífera nativa da América do Sul encontrada no Sul e Sudoeste do Brasil e Norte da Argentina. A casca da semente do pinhão é rica em taninos e até o momento, pouco explorada em estudos científicos. O objetivo deste trabalho foi investigar os possíveis efeitos de um extrato de casca de pinhão rico em taninos na atividade das amilases salivar e pancreática in vitro e in vivo. Todos os resultados obtidos com o extrato de casca de pinhão foram comparados com os obtidos utilizando-se um tanino comercial de Acacia mearnsii e acarbose, um bem conhecido inibidor de amilases.
MÉTODOS - -Amilase salivar humana e -amilase pancreática suína foram adquiridas da Sigma-Aldrich Co. Tanino comercial foi obtido junto à Labsynth. As sementes do pinhão foram cozidas em água sob pressão por 30 min. Após o cozimento, as sementes foram descascadas e as cascas secas foram trituradas até pó fino. Ao pó das sementes foi adicionado etanol a 70% em água e a mistura mantida sob agitação para extração dos taninos. O etanol foi eliminado por rota-evaporação e o material foi posteriormente liofilizado para eliminação da água. O pó seco obtido foi mantido em freezer até uso. Os experimentos cinéticos com a amilase salivar foram realizados a 40ºC em tampão Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, contendo EDTA 10 mM e azida sódica 1 mM. Os experimentos com a amilase pancreática foram realizados em tampão fosfato 20 mM, pH 6,9 contendo NaCl 6,7 mM. Amido de batata foi utilizado como substrato. Sua hidrólise foi medida na ausência ou presença de um dos inibidores. Após 5 min, os açúcares redutores produzidos foram quantificados pelo método do ácido 3,5 dinitro-salicílico, utilizando maltose como padrão. Para o teste de tolerância oral ao amido, ratos machos Wistar (200-250 g) foram divididos em 5 grupos (n=4). Para os animais do grupo I (controle positivo), amido comercial de milho (1 g por kg de peso) foi administrado por gavagem. Os animais do grupo II (controle negativo) receberam água. Os animais do grupo III receberam amido comercial mais acarbose (50 mg/kg). Os animais do grupo IV receberam amido comercial mais tanino comercial (250 mg/kg). Os animais do grupo V receberam amido comercial mais extrato de casca de pinhão (250 mg/kg). A glicemia foi determinada antes da administração do amido (tempo zero) e após 15, 30, 45 e 60 min. As amostras de sangue foram obtidas da veia da cauda e a glicemia avaliada com auxílio de um glicosímetro (Accu-Chek® Active Glucose meter).
PRINCIPAIS RESULTADOS - A dependência da concentração dos inibidores foi avaliada a uma concentração fixa de amido variando-se as concentrações dos inibidores extrato de casca de pinhão, tanino comercial e acarbose. Todos os valores obtidos foram expressos como frações dos valores obtidos na ausência dos inibidores e plotados contra as concentrações dos inibidores. Os inversos das velocidades relativas foram representados para avaliar de forma preliminar se as inibições eram do tipo linear, parabólica ou hiperbólica. O efeito inibitório do extrato da casca do pinhão sobre a amilase salivar foi pequeno a baixas concentrações, mas acelerou a concentrações mais altas de forma que a dependência de 1/v da concentração foi parabólica pelo menos até 80 g/mL. Para o tanino de Acacia mearnsii a atividade da enzima diminui quase que 8 linearmente até 500 g/mL, resultando numa inibição parabólica. Para a acarbose, a dependência foi côncava até 8 g/mL resultando em uma dependência linear de 1/v. A amilase pancreática foi mais sensível a todos os inibidores. Para o extrato de pinhão a inibição foi do tipo parabólico, mas foi linear para o tanino de Acacia mearnsii. Finalmente, foi do tipo parabólico com a acarbose. A análise cinética revelou para os três inibidores uma inibição do tipo mista. Para testar a efetividade dos inibidores in vivo, os níveis glicêmicos foram avaliados após o consumo de amido na presença ou ausência dos inibidores. Quando amido sozinho foi administrado a ratos em jejum, a glicemia elevou-se após 60 min. Para os ratos controle, os níveis glicêmicos permaneceram inalterados. Ambos acarbose e tanino de A. mearnsii preveniram consideravelmente a elevação da glicemia. O extrato de casca de pinhão teve um efeito similar, mas após 45 min, um aumento da glicemia foi observado, seguido de uma redução aos 60 min para valores próximos aos basais. Avaliações das áreas sobre as curvas permitem concluir que os três inibidores foram efetivos em prevenir a elevação da glicemia após ingestão de amido. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO - Os resultados obtidos neste estudo revelam que o extrato de casca de pinhão é um inibidor eficiente das amilases salivar e pancreática in vitro. O extrato de casca de pinhão foi eficiente também em reduzir a glicemia pós-prandial após administração de amido. O padrão cinético da inibição das amilases pelo extrato de casca de pinhão é complexo, e a natureza parabólica da inibição sugere a formação de complexos EI2 e ESI2. Complexidade similar foi detectada neste trabalho também para os inibidores tanino de A. mearnsii e acarbose. Comparando-se as constantes de inibição, a seguinte sequência pode ser escrita tanto para a amilase salivar quanto para a amilase pancreática: acarbose > extrato de casca de pinhão >tanino de A. mearnsii. O extrato de casca de pinhão pode ser útil para suprimir a hiperglicemia pós prandial em pacientes diabéticos. Ao reduzir a ingestão calórica pela inibição do metabolismo de carboidratos, o extrato de casca de pinhão pode, ao menos em princípio, promover a perda de peso e combater a obesidade. Para compreensão dos mecanismos inibitórios envolvidos, novos estudos visando a identificação dos principais componentes presentes no extrato estão em andamento.
PALAVRAS-CHAVE: inibidores da α-amilase; Diabetes; Perda de peso; Pinhão; Taninos condensados.
Artigos Publicados Vinculados a Dissertação:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0963996913006583?via%3Dihub